Inactivación del suero por calor no altera los valores de inmunoglobulinas

¿Es posible inactivar el suero con calor para disminuir el riesgo de contagio en laboratorio sin alterar el proceso diagnóstico?

RECOLECCIÓN: BETSY MARCILLO
REDACCIÓN:
CLAUDIA ELIZABETH SANDOVAL GONZALEZ
EDICIÓN: CAMILA NARVÁEZ CAICEDO, MD. 
APROBACIÓN:
VÍCTOR SECO-HIDALGO, Ph.D. Esp. – BIOLOGÍA MOLECULAR Y DE SISTEMAS  

Department of Laboratory Medicine, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou, 510515, China  

20 de junio de 2020

23 de junio de 2020

  • La muestra es pequeña.

Resultado principal del artículo
Una elevación en la temperatura de las muestras de sangre de hasta 56°C por 30 minutos no altera los anticuerpos para detectar SARS-COV-2 y, por ende, no disminuye la eficacia en el diagnóstico por medio del inmunoensayo con ELISA.

Conclusión o recomendación de los autores del artículo
Se recomienda la inactivación del suero con calor para minimizar el riesgo de contaminación en el personal de laboratorio.

Calificación de la evidencia según COVID19EC
El Grupo COVID19EC califica a este artículo con un grado de evidencia 2E y nivel de recomendación 1C.

Estudio tipo caso control realizado en Wuhan, China.

Duración del estudio
En el periodo de 26 de febrero a 6 de marzo del 2020.

Pacientes

Número: Se reclutaron de manera retrospectiva 62 pacientes diagnosticados de COVID-19 y 18 pacientes sanos para el grupo control del Hospital Hankou en Wuhan.

Grupos

    • Grupo de casos: 62

    • Grupo control: 18

Desarrollo del estudio
Se tomaron muestras de hisopado laríngeo y de sangre de todos los pacientes de ambos grupos. El diagnóstico de enfermedad por COVID-19 se realizó por RT-PCR de las muestras de hisopado. En las muestras de sangre, se realizó prueba de ELISA para la detección de anticuerpos.  Durante la prueba de ELISA, se obtuvo dos muestras de suero fresco de cada paciente. Una fue a una cabina de bioseguridad y la otra se incubó a 56 grados centígrados durante 30 minutos y luego se usó radiación UV por 30 minutos para volver a la temperatura ambiente.

Para la detección de anticuerpos se diluyó el suero después de su centrifugación, se agregó suero de pacientes positivos o negativos para COVID-19 y se colocó el antígeno recombinante viral. Después de permanecer a 37°C por 40 minutos, se lavaron las muestras y se añadió el antígeno viral recombinado. Se mantuvo la misma temperatura por 20 minutos más. Finalmente, se agregó peróxido de urea y tetrametilbencidina por 10 minutos para lograr una reacción colorimétrica, la misma que se detuvo con solución de H2SO4. El resultado final se interpretó con un lector de microplacas de 450nm.

Definiciones
Interpretación de resultados:

  • Negativo: resultado menor al valor de corte.

  • Débilmente positivo: resultado > valor de corte y < 0.5.

  • Positivo: resultado > 0.5.

Objetivos del estudio

  • Determinar si la incubación de las muestras de suero inactiva o altera los valores de IgM e IgG en pacientes con enfermedad por COVID-19.

  • Determinar si la incubación altera el diagnóstico de COVID-19 por medio de ELISA.

  • Características de los 80 participantes:

    • 77,50% eran pacientes.

    • 60% de los pacientes eran hombres.

    • La edad media fue de 65 años.

  • La densidad óptica de fue significativamente mayor en las muestras que fueron centrifugadas que en el suero fresco (Z = – 3.729 para la IgM y Z= -7.609 para IgG, ambas con p ˂001).

  • Los valores de anticuerpos IgG aumentaron en las muestras inactivada por calor de pacientes sanos (Z=-3.224 con p=0.001), sin embargo se mantuvieron en resultados negativos. Los valores de anticuerpo IgM no fueron alterados por el calor.

  • En el grupo de casos, los valores de IgM e IgG aumentaron después de la inactivación por calor, pero su tasa de detección no cambió.

    • IgM: Z= -3.390 con p= 0.001.

    • IgG: Z= -6.797 con p˂001.

  • La taza de coincidencia fue importante en ambas inmunoglobulinas:

    • IgM k= 0.971 con p˂001.

    • IgG k= 0.910 con p˂001.

Prueba de Wilcoxon para las variables paramétricas.

Prueba de Kruskal-Wallis para las variables categóricas.

Prueba Kappa para determinar la consistencia entre suero fresco e incubado.

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Revisa el Protocolo Metodológico de COVID19EC que se encuentra en la página principal 

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